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進口和國產(chǎn)ELISA試劑盒檢測HBsAg ELISA陽性結果確證分析
更新時間:2013-09-17   點擊次數(shù):1526次

 乙肝表面抗原(HBsAg)血清檢測是獻血者和肝炎病人乙肝病毒感染的重要依據(jù) , 由于ELISA法監(jiān)測簡單、快速、成本低且具有較好的特異性和較高的靈敏度,特別適合大批獻血員的篩查,已經(jīng)成為血站和臨床的主要檢驗方法。
由于不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)ELISA試劑盒的方法不同,導致靈敏度也不相同。為了深入了解血液HBsAg ELISA篩查陽性樣本確證結果,分別采用進口和國產(chǎn)ELISA試劑盒進行血液篩查,中和實驗及分子生物學PCR方法對陽性結果進行確證分析,對15400例無償獻血者進行國產(chǎn)和進口試劑篩查,155例陽性結果進行多方法確證分析,現(xiàn)將結果報告如下。

1 材料與方法
1.1 對象
收集深圳市無償獻血者樣本共15400例。所有樣本均經(jīng)乙肝金標試紙條篩查合格。
1.2 檢查項目及標準
血液篩查按衛(wèi)生部《獻血者健康檢查標準》。HBsAg中和實驗中和率>50%為確證陽性。
1.3 方法
HBsAg篩查兩遍均采用ELISA法,確證實驗為中和實驗,對ELISA陽性而中和實驗陰性樣本應用PCR法復證。
1.4 試劑
HBsAg初篩為國產(chǎn)試劑,復查為進口試劑,HBˉsAg中和試劑為美國諾泰公司產(chǎn)品。定性PCR采用美國諾泰公司和上海伊麗薩生物科技。
1.5 儀器
瑞士TECAN RSP-200及瑞士MICRO STAR全自動加樣儀,Microlab FAME和德國DADE Behring全自動酶免分析儀。德國ROCHE COBAS PCR分析儀和PE5700核酸擴增儀。

2 結果
2.1 以衛(wèi)生部臨床檢驗中心的1ng/ml HBsAg質(zhì)控血清,用正常血清稀釋隨標本檢測,國產(chǎn)ELISA試劑盒檢測靈敏度為0.5ng/ml,進口ELISA試劑盒為0.10ng/ml。用中和實驗對稀釋0.1ng/ml HBsAg質(zhì)控血清進行10批次檢測,均成陽性結果。
2.2 對15400人份血樣用國產(chǎn)和進口ELISA試劑盒檢出HBˉsAg陽性樣本155份(占總數(shù)0.99%),經(jīng)中和實驗確證陽性122例,HBsAg真陽性檢出率為0.79%,對單進口或國產(chǎn)試劑陽性而中和實驗確證陰性的標本用PCR定性實驗檢測DNA復證, 33例(占總數(shù)0.21%)中和實驗和PCR結果均為陰性,提示ELISA結果可能為假陽性。

2.3 確證實驗陽性的122份樣本S/CO值
其中進口試劑S/CO值分布以>3為大多數(shù),占91.7%,表 明進口ELISA試劑盒靈敏度高,不易漏檢。國產(chǎn)ELISA試劑盒S/CO值分布以1~10之間為多數(shù)占65.5%,而1~0.7區(qū)間有11例,占9%,表明試劑靈敏度欠佳。

3 討論
由于兩種試劑靈敏度不同,其結果差異較大。在155例ELISA陽性樣本中,共122例確證陽性,其中國產(chǎn)試劑檢出88例,檢出率為72.1%,進口試劑全部檢出,兩者差異有顯著性(X 2 =17.1,P<0.05)。在進口試劑單陽性結果40例中,經(jīng)確認34例為陽性,國產(chǎn)試劑未檢出,國產(chǎn)試劑存在一定的漏檢率。主要由于0.5~0.1ng/ml的HBV不能檢出的原因。在33例ELISA陽性確證實驗陰性樣本中,進口試劑占6例,為18.2%,國產(chǎn)試劑27例,占71.8%,進口試劑假陽性率明顯比國產(chǎn)試劑低。為減少輸血后乙肝感染,在復檢時采用高靈敏度特異性較好的進口ELISA試劑盒是很有必要的。
由于中和實驗具有特異性高,可操作性強,在對乙肝病毒DNA檢測條件要求很高的情況下,運用中和實驗進行ELISA陽性結果的確定分析,具有很高的實用價值。

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