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免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的概述
更新時(shí)間:2011-11-15   點(diǎn)擊次數(shù):1413次

免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)或稱免疫細(xì)胞化學(xué)(1CC)是根據(jù)特異性抗原抗體反應(yīng)的原理來定位組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原或抗體成分。自1940年Coons創(chuàng)建了免疫熒光組化技術(shù)檢測冰凍切片中的相關(guān)抗原成分以來,已有60涂年的歷史。

免疫組織化學(xué)技術(shù)根據(jù)示蹤物的不同可構(gòu)成不同的免疫組織化學(xué)方法,如標(biāo)記熒光素或熒光蛋白可構(gòu)成免疫熒光組化技術(shù);如標(biāo)記酶(HRP或AKP)可構(gòu)成免疫酶組化技術(shù);如標(biāo)記金或鐵可構(gòu)成免疫膠體金(銀)或膠體鐵技術(shù)。

1967年Nakane創(chuàng)建的免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是目前開展免疫組織化學(xué)技術(shù)zui常用的方法。該技術(shù)是借助于抗體與抗原的特異性結(jié)合并利用酶作用底物所產(chǎn)生的顏色反應(yīng)來顯示抗原存在的一種技術(shù)。其基本原理與免疫熒光技術(shù)相同,是在免疫熒光技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,所不同的是免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是用酶標(biāo)記抗體。其方法是以酶作示蹤物,與抗原或抗體結(jié)合,然后根據(jù)酶與底物間產(chǎn)生的可溶性或不溶性顏色產(chǎn)物,借助于光鏡或電鏡觀察細(xì)胞及亞細(xì)胞水平的抗原或抗體的存在和分布。

Nakane等將辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記在抗體免疫球蛋白分子上,制成酶標(biāo)抗體,成功地創(chuàng)建了酶標(biāo)抗體技術(shù)。

1970年,Sternberger利用酶免疫學(xué)原理,建立了非標(biāo)記抗體免疫過氧化物酶法,即PAP復(fù)合物法。自那以后,免疫酶組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展,得到廣泛應(yīng)用,相繼出現(xiàn)了親和免疫組化技術(shù)、免疫堿性磷酸酶技術(shù)、多聚螯合物酶技術(shù)、自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)等新技術(shù)。它與免疫熒光技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):

①不需要特殊顯微鏡,目前已成為zui常用的IHC方法,應(yīng)用廣泛;
②定位準(zhǔn)確,對比度好;
③染色標(biāo)本可長期保存;
④可用蘇木精等染料復(fù)染,便于與形態(tài)學(xué)相結(jié)合;
⑤顯色反應(yīng)的產(chǎn)物顏色易分辨,且電子密度大,便于光鏡及電鏡觀察;
⑥可根據(jù)酶和底物/供氫體的不同顯示不同的顏色,可非常容易地進(jìn)行雙重或多重染色。

 

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