东北体育生巨大粗爽gay,久久综合久久鬼色,农村诱奷小箩莉h文合集,久久精品无码av

在PCR儀上完成一個PCR反應所需要的時間決定于以下幾個因素：

1、模塊升溫和降溫時間

2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間

3、延伸時間

4、循環(huán)次數(shù)

下面就以上幾點做一點分析，以便大家了解快速PCR技術與快速PCR儀的區(qū)別。

1、模塊升溫和降溫度時間

PCR儀一般會標明升溫速度和降溫速度，但標的大多是zui大變溫速度，也就是說是瞬間達到的速度。而與實驗相關的平均升降溫速度只有極少量廠家標明。以平均2度和4度（能做到平均升降溫4度的儀器極少）來計算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每一個循環(huán)差20秒鐘。以一般35個循環(huán)來計算，影響實驗時間700秒，也就是不到12分鐘。實際還要考慮過沖問題，影響時間還會少些。

2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間

模塊溫度達到后，PCR管內(nèi)的溫度遠沒有達到（塑料和水的導熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上），需要時間來使二者達到平衡。一般有四種辦法來減少這一時間，一是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達到時降到目標溫度，但太高的過沖可能造成實際溫度過沖，影響PCR反應結(jié)果；二是減少PCR反應液的體積，但體積變小時PCR反應的可靠性會降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄時強度不夠；四是增加PCR管與模塊貼附程度。

3、延伸時間

延伸時間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時，可能考慮將延伸時間變?yōu)?（即兩步法）；采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實驗都可以用高速的DNA聚合酶。

4、循環(huán)次數(shù)

循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關。

所謂快速PCR技術是將快速PCR儀與超薄管（或特殊貼附技術）以及高速DNA聚合酶等技術整合在一起，可達到較短時間完成PCR反應。而一些廠家在向用戶推xiao PCR儀時，不去說明快速PCR技術，只強調(diào)PCR儀速度快（大都用升降溫速度來HuYou用戶）。好像買了快速PCR儀后，原來1個半小時的擴增時間變會縮短成半小時似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實驗結(jié)果。特別是進行多重PCR擴增的用戶，系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。

快速PCR技術與快速PCR儀是兩回事。快速PCR儀只能縮短PCR反應時間10分鐘左右，要實現(xiàn)真正的快速PCR反應，還需要其他一些努力。大多數(shù)用戶根本就不需要快速PCR技術。